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布鲁氏杆菌恒温检测荧光型试剂盒

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商品说明

【产品名称】布鲁氏杆菌恒温检测荧光型试剂盒

【产品货号】WLDR21056K48

【包装规格】48份/盒

【预期用途】本试剂盒仅供科研使用。本试剂盒适用于布鲁氏杆菌定性检测。

【检测原理】本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下(一般为39 ºC~42 ºC),反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶等利用特异性引物进行快速核酸扩增反应。随着扩增产物积累,设计的特异性分子探针在核酸外切酶的作用下释放荧光信号,使用荧光检测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。【主要组成成分】

组成
含量主要成分
E buffer1ml*2管反应缓冲液
B buffer
0.15ml*1管Mg2+
正对照模板(056)0.1ml*1管合成质粒
试剂
48T酶、dNTPs等

【储存条件及有效期】

  1. 储存条件:温度 ≤ -20 °C恒温环境,避光保存,避免重压;

  2. 产品有效期:14个月;

  3. 生产日期见外包装。

【适用仪器】

  1. 适用于Applied Biosystems 7500、

QuantStudio 3/5、QuantStudio 6/7 Flex等荧光定量PCR仪;

  1. 适用于我司的WL-16-III等恒温荧光检测仪。

【样本要求】

  1. 按照相关标准采集样本;

  2. 样本采集后建议尽快检测,24小时内进行检测样本可暂时保存于4 ºC;长时间保存则置于-70℃以下,并避免反复冻融;

  3. 如使用样本保存液或快速释放剂等处理样本,注意影响蛋白活性的物质如酸、碱、盐、表面活性剂等残留对试剂性能的影响。

【检测方法】

1.试剂准备(试剂准备区)

1.1取出包装盒中的各组分(冻干试剂除外),室温放置,融化后混匀,瞬时离心备用(注意,如未完全融化直接使用可能对实验效果产生影响);

1.2根据待测样本、阴性和阳性对照的数量准备冻干试剂,每个冻干试剂加入37.5 μL E buffer。

2.样本处理(样本处理区)

2.1核酸提取

选择合适的核酸提取方法和试剂提取样本核酸;

2.2向反应管中加入10 μL核酸模板(模板量可调整,以无菌水补足;即核酸模板加无菌水共10 μL),阳性对照加入10 μL正对照模板,阴性对照加入10 μL无菌水

2.3每个反应管加入2.5 μL B buffer, 盖好管盖(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧);上下颠倒反应管8-10次充分混合,混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,转移至扩增区。

3.核酸扩增(扩增区)

根据不同的应用需求可以选择不同的程序设置方式:

  1. 程序设置方案推荐):灵敏度高,适用于低浓度样本检测,但扩增曲线可能出现非典型S形态,不同浓度样本结果Ct无明显规律

image.png

程序设置方案一结果示例

2.  程序设置方案二:操作简便,低拷贝样本检出率低于程序设置方案一。

image.png

程序设置方案二结果示例

*注:结果示例仅用于说明两种程序下荧光曲线差异,实际结果以实验为准。

步骤温度时间循环数
1.恒温孵育39℃-42℃
4min/
2.荧光检测39℃-42℃30s30

注:

i 温度设置推荐39℃;

ii. 步骤为孵育阶段,在恒温金属浴进行;孵育结束后上下颠倒反应管8-10次充分混匀后瞬离,再进入步骤

iii. 步骤为荧光检测阶段,检测通道为FAM,30s/cycle,30个循环,时长15分钟;

iiii.使用ABI系列荧光定量PCR仪,请务必于Passive Reference和Quencher处均选择“None”。

3.1.2 质量控制

阴性对照Ct值 27或未检出,阳性对照Ct值 ≤ 15;同一实验需同时满足以上要求,否则本次实验视为无效

3.1.3 结果判读

根据分析后荧光曲线图像调整检测通道的基线(Baseline)阈值(Threshold),基线起始设1~2循环、终止设在本组数据中最小的CT值循环处(一般可设置为2~4,使各项参数符合“3.1.2质量控制”中的要求,然后进行阴阳性判定:FAM通道扩增曲线呈指数增长且Ct<27为阳性;FAM通道扩增曲线无Ct值或Ct≥27为阴性。

3.2程序设置方案

3.2.1 程序设置

39℃,FAM通道30秒采集一次荧光信号,设置40个循环。

3.2.2质量控制

阴性对照Ct值≥35或未检出;阳性对照Ct值≤ 20;同一实验需同时满足以上要求,否则本次实验视为无效

3.2.3结果判读

根据分析后荧光曲线图像调整检测通道的基线(Baseline)阈值(Threshold),基线起始设1~2循环、终止设在本组数据中最小的CT值循环处(一般可设置为2~6,使各项参数符合“3.2.2质量控制”中的要求,然后进行阴阳性判定:FAM通道扩增曲线呈指数增长且Ct<35为阳性;FAM通道扩增曲线无Ct值或Ct≥35为阴性。

【检验结果的解释】

  1. 采集、运输、保存不当,试剂运输、保存、配制不当都可能会影响实验结果,甚至会导致假阴性结果

  2. 如果实验室污染、试剂污染、样品交叉污染,可能出现假阳性结果

  3. 因方法学差异,使用市面上部分品牌的荧光PCR仪可能出现荧光曲线异常现象,推荐使用我司设备或Applied Biosystems系列荧光定量PCR仪。

【注意事项】

  1. 使用前请仔细阅读说明书,严格按照操作步骤进行操作;

  2. 样品处理应该严格按照生物安全规范操作,实验过程中应穿着工作服,戴一次性手套,实验分区域进行避免交叉污染;

  3. 使用有效期内试剂,且各组分不得与其他批号混用,试剂盒各组分使用前室温充分融化后混匀,短暂离心后使用

  4. 反应管中尽量避免气泡存在,管盖盖紧,反应结束后扩增管置于密封袋内,按要求丢弃处理;

  5. 本试剂盒仅用于科研使用,不作为临床诊断使用。


商品参数

【厂家信息】

企业名称:安普未来(常州)生物科技有限公司

地址:江苏省常州市武进区常武中路 18-67号中国以色列常州创新园 9#厂房 4 层

服务电话:18068763522

企业名称:潍坊安普未来生物科技有限公司

地址:山东省潍坊市高新区高新二路 36 号孵化器大楼 F201

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潍坊安普未来生物科技有限公司

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邮箱:sales@amp-future.com

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