【产品名称】布鲁氏杆菌恒温检测荧光型试剂盒
【产品货号】WLDR21056K48
【包装规格】48份/盒
【预期用途】本试剂盒仅供科研使用。本试剂盒适用于布鲁氏杆菌定性检测。
【检测原理】本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下(一般为39 ºC~42 ºC),反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶等利用特异性引物进行快速核酸扩增反应。随着扩增产物积累,设计的特异性分子探针在核酸外切酶的作用下释放荧光信号,使用荧光检测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。【主要组成成分】
组成 | 含量 | 主要成分 |
E buffer | 1ml*2管 | 反应缓冲液 |
B buffer | 0.15ml*1管 | Mg2+ |
正对照模板(056) | 0.1ml*1管 | 合成质粒 |
试剂 | 48T | 酶、dNTPs等 |
【储存条件及有效期】
储存条件:温度 ≤ -20 °C恒温环境,避光保存,避免重压;
产品有效期:14个月;
生产日期见外包装。
【适用仪器】
适用于Applied Biosystems 7500、
QuantStudio 3/5、QuantStudio 6/7 Flex等荧光定量PCR仪;
适用于我司的WL-16-III等恒温荧光检测仪。
【样本要求】
按照相关标准采集样本;
样本采集后建议尽快检测,24小时内进行检测样本可暂时保存于4 ºC;长时间保存则置于-70℃以下,并避免反复冻融;
如使用样本保存液或快速释放剂等处理样本,注意影响蛋白活性的物质如酸、碱、盐、表面活性剂等残留对试剂性能的影响。
【检测方法】
1.试剂准备(试剂准备区)
1.1取出包装盒中的各组分(冻干试剂除外),室温放置,融化后混匀,瞬时离心备用(注意,如未完全融化直接使用可能对实验效果产生影响);
1.2根据待测样本、阴性和阳性对照的数量准备冻干试剂,每个冻干试剂加入37.5 μL E buffer。
2.样本处理(样本处理区)
2.1核酸提取
选择合适的核酸提取方法和试剂提取样本核酸;
2.2向反应管中加入10 μL核酸模板(模板量可调整,以无菌水补足;即核酸模板加无菌水共10 μL),阳性对照加入10 μL正对照模板,阴性对照加入10 μL无菌水;
2.3每个反应管加入2.5 μL B buffer, 盖好管盖(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧);上下颠倒反应管8-10次充分混合,混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,转移至扩增区。
3.核酸扩增(扩增区)
根据不同的应用需求可以选择不同的程序设置方式:
程序设置方案一(推荐):灵敏度高,适用于低浓度样本检测,但扩增曲线可能出现非典型S形态,不同浓度样本结果Ct无明显规律;
程序设置方案一结果示例
2. 程序设置方案二:操作简便,低拷贝样本检出率低于程序设置方案一。